Control de la densidad óptica en estándares de McFarland mediante espectrofotometría visible
Industria/segmento: Laboratorios
Equipos/Familia: HI801
Descripción:
Los estándares McFarland se utilizan para estandarizar el número aproximado de bacterias en una suspensión líquida comparando la turbidez de la suspensión de prueba con la del estándar McFarland.
Un estándar McFarland es una solución química de cloruro de bario y ácido sulfúrico; La reacción entre estos dos químicos da como resultado la producción de un precipitado fino, sulfato de bario.
Cuando se agita bien, la turbidez de un estándar McFarland es visualmente comparable a la de una suspensión bacteriana de concentración conocida (estándar).
El patrón 0,5 de McFarland tiene una aplicación especial en la preparación de Inóculos bacterianos para la realización de pruebas de sensibilidad antimicrobianas. Este patrón se utiliza para la preparación de inóculos en dilución de agar estandarizado, procedimientos de macro y micro dilución de caldo, de difusión en disco y pruebas de sensibilidad para organismos anaerobios
La medida del número de individuos puede ser estimada mediante métodos indirectos instrumentales bajo Nefelometría y/o espectrofotometría.
Se debe mencionar que la principal desventaja de usar la densidad óptica para un modelo predictivo en el crecimiento celular es que no se puede tomar como una medida directa de viabilidad celular, ya que tanto las células viables como las no viables absorben a una longitud de onda específica.
El patrón o la escala de McFarland consiste en una serie de tubos herméticamente cerrados, previamente calibrados y con una densidad óptica diferente originada por la aparición de un precipitado de sulfato de bario (BaSO4) resultante de la reacción entre el cloruro de bario (BaCl2) al 1,175% (0,048 M) y el ácido sulfúrico (H2SO4) al 1% (0,36N).
Esta turbidez puede interpretarse ópticamente o por métodos espectrofotométricos y cada una de ellas se corresponde a una concentración conocida de bacterias/mL. Para cada cepa bacteriana hay que establecer la equivalencia entre la turbidez de cada tubo y la masa o la concentración de bacterias (CEL/mL) que genera una turbidez similar.
Para asegurar la densidad del estándar de McFarland este puede ser chequeado usando un espectrofotómetro con una celda de cuarzo de 1 cm; para el estándar 0,5 de McFarland, la absorbancia (Abs) a una longitud de onda de 625 nm puede estar entre 0,08 a 0,1.
Los patrones de McFarland se utilizan como patrones de turbidez en la preparación de suspensiones de microorganismos. El patrón 0,5 de McFarland tiene una aplicación especial en la preparación de Inóculos bacterianos para la realización de pruebas de sensibilidad antimicrobianas y corresponde aproximadamente a una suspensión homogénea de Escherichia coli de 1.5 x 108 células por mL.
Aplicación:
Un Laboratorio farmacéutico dedicado a la producción y comercialización de medicamentos antihomotóxicos y antizootóxicos requiere confirmar la veracidad de los estándares primarios de McFarland suministrados por su proveedor y adicionalmente verificar los estándares secundarios preparados a partir de dicho patrón.
El encargado del área de calidad microbiológica de la empresa indica que los métodos visuales de comparación de las soluciones McFarland generan bastante subjetividad e incertidumbre y requiere datos certeros y veraces para asegurar la calidad de su proceso. Se comunicó con el área de Consultoría Científica de HANNA INSTRUMENTS Colombia para recibir una asesoría técnica personalizada respecto a su necesidad.
Se indica que, de acuerdo con las especificaciones analíticas, el equipo espectrofotométrico HI 801 puede suplir sus requerimientos de medición.
El iris HI 801 presenta una selección de longitud de onda precisa entre 340 nm y 900 nm para cumplir con el método completo y la exactitud que es necesaria en los laboratorios profesionales, instalaciones de tratamiento de agua, de control de calidad y otros.
Los resultados son consistentes y exactos debido a la alta calidad del sistema óptico de diseño exclusivo.
Las opciones de personalización incluyen formas y tamaños de diferentes celdas, curvas de calibración personalizadas y métodos específicos.
Se realizó creación de metodología de usuario, se ajustó inicialmente en 625 nm con unidades de absorbancia y tipo de celda de 10 x 10 mm.
El equipo HI 801 presenta adaptador de cubetas para celdas de 10 x 10 mm, se realiza blanco con agua desionizada y posterior medición de estándar 0,5 de McFarland adquirido recientemente.
Los valores arrojados con varias repeticiones se encontraban en un rango de entre 0,09 y 1,01 en términos de absorbancia (Abs) y con un RSD (Desviación Estándar Relativa) menor al 2% indicando alta precisión y confiabilidad tanto en el equipo como en su estándar primario.
